連翹酯苷論文分析

　　1 、材料

　　1。1 儀器與試劑

　　美國BECKMAN高效液相色譜儀，125型泵，168型PDA檢測器，32Karat色譜工作站；HAMILTON微量進樣器（HAMILTON公司）；微孔濾膜φ＝13 mm，0。45 μm（天津市色譜科學技術公司）；YCQ—300型超聲波清洗器（上海凱波超聲裝置有限公司）。甲醇為色譜純，水為雙蒸水並經0。45 μm水系濾膜過濾。

　　1。2 樣品

　　連翹酯苷、連翹苷對照品均為自行分離精製，並經UV、IR、NMR鑑定結構，HPLC檢測，面積歸一化法計算純度，均大於99%。選西安醫學院種植的連翹和金鐘花為樣株 Vahl和F。viridissima Lindl。，果實具體採收時間見表1。50 ℃乾燥至恆重後，研成粉末，過2O目篩，備用。

　　2 、方法與結果

　　2。1 色譜條件與系統適用性試驗

　　色譜柱：Diamonsil—C18（5 μm，4。6 mm×250 mm）。流動相：A—水，B—甲醇；B相洗脫梯度：0～14 min，34。6%；14～15 min， 34。6%～43。5%；15～23 min，43。5%；23～24 min，43。5%～45%；24～34 min，45%；34～36 min，45%～80%；36～40 min，80%；流速：1 mL/min。柱溫：室溫28 ℃；靈敏度0。02 AUFS；檢測波長270 nm。理論塔板數以連翹酯苷計應不低於3 300，以連翹苷計應不低於7 600。色譜圖見圖1。

　　2。2 對照品溶液的製備

　　分別精密稱取連翹酯苷和連翹苷對照品9。86、4。40 mg置於10 mL量瓶中，用60%甲醇定容至刻度，置於冰箱中（4 ℃）儲存備用。

　　2。3 供試品溶液的製備

　　精密稱取不同採收期連翹、金鐘花果實的乾燥粉末各約1。000 g置於具塞三角瓶中，精確加入甲醇30 mL，精密稱質量，超聲提取30 min後，用甲醇補足質量，加20 mL雙蒸水，混勻，用微孔濾膜（4。5 μm）過濾，作為供試品溶液。

　　2。4 標準曲線及線性範圍的考察

　　精密吸取上述混合對照品溶液3、5、10、20、40、50 μL，進樣測定，按上述色譜條件測定峰面積，按外標法以進樣量X（μg）對峰面積Y進行迴歸，得連翹酯苷和連翹苷的迴歸方程，分別為：Y＝582 121X－816 019，r＝0。999 7；Y＝580 793X－33 182，r＝0。999 8。結果表明，連翹酯苷進樣量在2。96～49。30 μg、連翹苷進樣量在1。32～22。00 μg範圍內與峰面積呈良好的線性關係。

　　2。5 檢測限和定量限測定

　　連翹酯苷的檢測限（S/N＝3）為18。72 ng/mg，定量限（S/N＝10）為62。41 ng/mL；連翹苷的檢測限（S/N＝3）為13。74 ng/mL，定量限（S/N＝10）為45。79 ng/mL。

　　2。6 精密度試驗

　　精密吸取混合對照品溶液20 μL，連續進樣6次，測定峰面積，結果連翹酯苷、連翹苷的RSD分別為1。20%、1。04%。。取同一連翹果實（LQ—1）樣品6份，製備供試品溶液，各取20 μL進樣，測定峰面積，計算，連翹酯苷、連翹苷的RSD分別為2。00%、0。68%。精密吸取混合對照品溶液20 μL分別於配製後的0、4、8、16、24、48 h內進樣，測定峰面積。計算連翹酯苷、連翹苷的RSD分別為1。61%、1。96%。結果表明，對照品溶液在48 h內穩定。

　　2。7 樣品中連翹酯苷、連翹苷的'含量測定

　　取連翹各部位的乾燥粉末，按供試品溶液製備方法操作，按照色譜條件測定峰面積，以外標法計算含量，採用二極體陣列檢測器對檢測波長進行了考察，分別提取並觀察230、254、270、280、324、365 nm波長處的色譜圖[4]。結果發現230、254、280 nm處其他物質的吸收較強，干擾較大，324、365 nm波長處干擾較小，但連翹苷無吸收，而270 nm處4個待檢測物質的吸收峰峰形較好且其他物質的吸收較弱，干擾較少，結果較為準確。故本試驗中選擇了270 nm作為檢測波長。