論關於重樓水提液對小鼠胃腸運動功能的影響論文
論關於重樓水提液對小鼠胃腸運動功能的影響論文
胃腸動力學異常性疾病發病率日益增高，而中藥在調節和改善胃腸功能方面有著自身的優勢。重樓為百 合 科 植 物 雲 南 重 樓 ( Paris polyphylla var.yunnanensis) 的乾燥根莖，又 名 七 葉 一 枝 花 ( Parispolyphylla var. chinensis)，以蚤休之名始載於《神農本草經》。其主要有效成分為甾體皂苷，並含有氨基酸、甾酮、蛻皮激素、黃酮苷等化合物。重樓藥用歷史悠久，近年來藥理研究表明，該屬植物具有止血、抗腫瘤、抗菌、抗炎等多方面藥理作用。臨床上，應用重樓治療的疾病越來越多，重樓是否影響胃腸功能，目前尚未見報道。本實驗以小鼠為研究物件，初步探討重樓水取液對小白鼠胃腸運動功能的影響。
1 材料與方法
1. 1 試劑 重樓(廣西壯族自治區百色市市售藥材)，經廣西右江民族醫學院民族醫學教研室覃道光教授鑑定為重樓根莖;活性碳末(廣東臺山化工廠，批號:940402);羧甲基纖維素鈉(天津市光復精細化工研究所，批號:20070708);硫酸阿托品注射液(河南潤弘製藥股份有限公司，批號:1104161);鹽酸腎上腺素注射液(天津藥業集團新鄭股份有限公司，批號:100912);新斯的明注射液(鄭州羚銳製藥股份有限公司，批號:1005161)。
1. 2 動物 昆明種小鼠 150 只，體質量 22 ～ 28 g，雌雄不限，由本院實驗動物中心提供，合格證號:SCXK(桂)2003-0003。
1. 3 儀器 ARII40/C 電子天平(奧毫斯，上海公司生產)。
1. 4 重樓水提液的製備 稱取重樓飲片 50 g，加入10 倍量水(500 mL)常溫浸泡18 h，大火煮沸後慢火煎煮1 h，過濾留下濾液，取濾渣再加水500 mL 煮沸後慢火煎煮1 h，過濾棄濾渣，合併兩次濾液用16 層紗布過濾，隔水蒸發濃縮，定容為 1 g·mL-1 ，冰箱冷藏，用時恢復至室溫。
1. 5 碳末懸液的製備 稱取活性碳末 5 g、羧甲基纖維素鈉 1 g 溶於 100 mL 雙蒸水中，攪拌均勻配製成碳末懸液，冰箱冷藏，用時恢復至室溫。
1. 6 對正常小鼠胃排空和小腸推進運動的影響 取30 只小鼠按體質量隨機分 3 組，即重樓水提液低劑量組(2. 5 g·kg-1 )，重樓水提液高劑量組(5. 0 g·kg-1 )和正常對照組，每組 10 只。灌胃給藥前，小鼠禁食12 h，每組小鼠均按每千克體質量劑量灌胃給藥，對照組給予等體積雙蒸水。灌胃給藥 30 min 後，再以5%碳末懸液 0. 25 mL·(10 g)-1灌胃給藥。20 min後，將小鼠處死，開啟腹腔，結紮胃賁門和幽門，取出胃，用濾紙吸乾後稱質量，然後沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內容物，再用濾紙吸乾，稱胃淨質量。計算胃內容物殘留率(%) = [(胃全質量 - 胃淨質量) /半固體米糊]×100% 。以胃內容物殘留率為指標評價胃排空速度。同時取出小腸自然平鋪於桌面上，將小腸擺成直線並測量，以幽門至回盲部的距離作為“小腸總長度”，以幽門至炭末推進前端的距離作為“炭末推進距離”。用下列公式計算炭末推進百分比:炭末推進比(%) = 炭末在小腸內推進距離/小腸總長度 ×100%。以炭末推進比為指標評價小腸推進速度。
1. 7 對阿托品所致小鼠胃排空和小腸推進抑制的影響 取小鼠 40 只，隨機分成 4 組，即正常對照組、單純阿托品組(0. 5 mg·kg-1 )、阿托品 + 重樓水提液低劑量組(2. 5 g·kg-1 )、阿托品 + 重樓水提液高劑量組(5 g·kg-1 )。實驗前小鼠禁食 12 h，重樓水提液高、低兩個劑量組的給藥劑量和方法同“1. 6”項，正常對照組和阿托品組給予等體積雙蒸水。灌胃給藥的同時正常對照組肌內注射等體積雙蒸水，其餘各組小鼠均按 0. 5 mg·kg-1 肌內注射阿托品，注射給藥30 min後，操作方法及計算方法按“1. 6”項進行。
1. 8 對腎上腺素所致小鼠胃排空和小腸推進抑制的影響 取小鼠 40 只，隨機分成 4 組，即正常對照組、單純腎上腺素組(0. 3 mg·kg-1 )、腎上腺素 + 重樓水提液低劑量組(2. 5 g·kg-1 )、腎上腺素 + 重樓水提液高劑量組(5 g·kg-1 )。實驗前小鼠禁食 12 h，重樓水提液高、低兩個劑量組的給藥劑量和方法同“1. 6”項，正常對照組和腎上腺素組給予等體積雙蒸水。灌胃給藥的同時正常對照組肌內注射等體積雙蒸水，其餘各組小鼠均按 0. 3 mg·kg-1 肌內注射腎上腺素，注射給藥30 min後，操作方法及計算方法按“1. 6”項進行。
1. 9 對新斯的明所致小鼠胃排空和小腸推進亢進的影響 取小鼠 40 只，隨機分成 4 組，即新斯的`明組(0. 125 mg·kg-1 )、新斯的明 + 重樓水提液低劑量組(2. 5 g·kg-1 )、新斯的明 + 重樓水提液高劑量組(5 g·kg-1 )、和正常對照組，每組 10 只 。實驗前小鼠禁食 12 h，重樓水提液高、低兩個劑量組的給藥劑量和方法同“1. 6”項，對照組給予等體積雙蒸水。新斯的明組、新斯的明 + 重樓水提液低劑量組、新斯的明+ 重樓水提液高劑量組在灌胃給藥的同時均按0. 125 mg·kg-1 肌內注射新斯的明，正常對照組肌內注射等體積雙蒸水。注射給藥 30 min 後，操作方法及計算方法按“1. 6”項進行。1.10 統計學方法 採用 SPSS 13. 0 版統計軟體進行統計學分析，資料以均數 ± 標準差(x ± s)表示，採用單因素方差分析，P<0. 05 表示差異有統計學意義。
2 結果
2. 1 對正常小鼠胃排空和小腸推進運動的影響 結果表明，與正常對照組比較，重樓水提液高、低兩個劑量組的胃內殘留率和小腸推進率差異有統計學意義。
2. 2 對阿托品所致小鼠胃排空和小腸推進抑制的影響 結果表明，與正常對照組比較，阿托品組的胃內殘留率和小腸推進率均差異有統計學意義。與阿托品組比較，重樓水提液低劑量組的小腸推進率和重樓水提液高劑量組的胃內殘留率均差異有統計學意義。
2. 3 對腎上腺素所致小鼠胃排空和小腸推進抑制的影響 結果表明，與正常對照組比較，腎上腺素組的胃內殘留率和小腸推進率均差異有統計學意義。與腎上腺素組比較，重樓水提液低劑量組的小腸推進率和重樓水提液高劑量組的胃內殘留率差異均有統計學意義。見表 3。2. 4 對新斯的明所致小鼠胃排空和小腸推進亢進的影響 結果表明，與正常對照組比較，新斯的明組的胃內殘留率和小腸推進率均差異有統計學意義。與新斯的明組比較，重樓水提液高、低兩個劑量組的胃內殘留率和小腸推進率均差異有統計學意義。
3 討論
3.1 胃腸運動的調節因素 胃腸運動主要由神經、體液因素進行調節。神經調節包括交感神經、副交感神經和存在腸壁內的腸神經系統 。交感神經神經末梢透過釋放去甲腎上腺素，作用於胃腸道平滑肌細胞膜上的腎上腺素能受體，而抑制胃腸運動。副交感神經末梢透過釋放乙醯膽鹼，作用於胃腸道平滑肌細胞膜上的 M 受體，而促進胃腸運動。胃腸道上主要存在膽鹼能 M 受體、腎上腺素 α 和 β 受體、組胺受體及多種胃腸激素受體。體液因素主要是胃腸激素的調節，胃腸激素種類較多，不同的胃腸激素，對胃腸活動產生不同的效應。
3. 2 重樓水提液對正常小鼠胃腸運動功能的影響實驗表明，重樓水提液低劑量組有促進小鼠小腸推進作用，重樓水提液高劑量組有抑制小鼠小腸推進作用，重樓水提液高、低兩個劑量組均有抑制小鼠胃排空的作用。此結果提示，在完整的神經體液因素調節下，不同劑量的重樓水提液對正常小鼠小腸推進功能表現不一;但均能抑制正常小鼠胃排空功能，這可能與腸道活動比胃活動更復雜性有關。
3. 3 重樓水提液對膽鹼能系統的影響 新斯的明為可逆性的抗膽鹼酯酶藥物 ，使膽鹼能神經末梢釋放的乙醯膽鹼破壞減少，突觸間隙中乙醯膽鹼積聚，具有興奮膽鹼能 M 受體的作用。實驗表明，重樓水提液高、低兩個劑量組均有拮抗新斯的明，抑制小鼠胃排空和小腸推進的作用。此結果提示，重樓水提液對胃腸運動抑制作用可能與阻斷 M 膽鹼能受體有關。阿托品是臨床上常用的一種 M 受體拮抗藥，透過阻斷 M 膽鹼能受體，使副交感神經抑制，導致胃腸平滑肌松，小腸推進運動減慢，臨床上常用於胃腸痙攣等疾病的治療。實驗表明，重樓水提液低劑量組有拮抗阿托品，促進小鼠小腸推進的作用，而重樓水提液高劑量組有協同阿托品，抑制小鼠胃排空的作用。此結果提示，重樓水提液對胃腸運動功能的影響可能不是單純與阻斷M 膽鹼能受體有關。
3. 4 重樓水提液對腎上腺素能系統的影響 支配胃腸的交感神經屬於腎上腺素能神經，其末梢透過釋放去甲腎上腺素，作用於胃腸道平滑肌細胞膜上的腎上腺素能受體，而抑制胃腸運動。實驗表明，重樓水提液低劑量組有拮抗腎上腺素，促進小鼠小腸推進的作用，而重樓水提液高劑量組有協同腎上腺素，抑制小鼠胃排空的作用。此結果提示，重樓水提液對胃腸運動功能的影響可能與腎上腺素能系統有關。綜上所述，重樓水提液可抑制胃運動，具有解除胃痙攣的作用，對於小腸運動，則不同的劑量產生不同的效應。因此，筆者推測重樓水提液對胃腸運動功能的影響除了與 M 膽鹼能受體、腎上腺素能系統有關外;也可能是由於中草藥成分複雜，胃腸機能狀態存在差異，對藥物中不同成分具有不同的反應結果;其作用機制有待進一步深入研究。本實驗對治療胃痙攣、腸功能紊亂等疾病提供一定的藥理理論基礎。