分劑量鏈脲佐菌素對糖尿病心肌病的病理學觀察論文
鏈脲佐菌素是一種氨基葡萄糖-亞硝基脲，是一種DNA烷基化試劑，能通過GLUT2葡萄糖轉運蛋白***GLUT2 glucose trasport protein***獨自進入細胞。對胰腺胰島胰島素誘發的β-細胞具毒性。鏈脲佐菌素對GLUT2陽性神經內分祕腫瘤細胞有毒性作用。以下是小編今天為大家精心準備的：分劑量鏈脲佐菌素對糖尿病心肌病的病理學觀察相關論文。內容僅供參考，歡迎閱讀!
分劑量鏈脲佐菌素對糖尿病心肌病的病理學觀察全文如下：
糖尿病***Diabetes Mellitus，DM***是一種嚴重的，複雜的代謝性疾病，全球約4%的人口催患該病。在發達國家己經達到流行病的比例回。中國糖尿病患者己高達9240萬，而糖尿病前期的患者更是高達1. 48億固。在人類，糖尿病與長期的心血管損傷相關，尤其是內皮功能障礙，纖維化和心肌病，增加了冠狀動脈疾病、心臟衰竭、心肌梗死和死亡的風險團。化學試劑鏈脈佐菌素***streptozotocin，STZ***和四尿嚓吒能選擇性地破壞胰腺日細胞，導致高血糖，是製備糖尿病併發症模型的重要工具。本研究利用STZ單次腹腔注射建立1型糖尿病性心肌病*** Diabetic cardiomyopathy，DCM***大鼠模型，探討STZ與DCM病理變化的劑量依賴效應，為DCM的治療提供模型依據。
1、材料與試劑
1. 1實驗動物和分組
雄性SD大鼠32只，清潔級，由安徽醫科大學實驗動物中心提供，體重 220-270 g。實驗前測每隻大鼠的血糖值範圍在3. 0-5. 0 mmol / L。將32只大鼠隨機等分為4組:採用單次腹腔注射STZ製備糖尿病模型，組1 STZ劑量為50 mg/kg;組2劑量為55 mg/kg;組3劑量為60 mg / kg ;對照組腹腔注射檸檬酸三鈉一檸檬酸緩衝液。
1. 2試劑和儀器
1. 2. 1試劑及主要溶液的配置
STZ***美國Sigma公司***，一20℃凍存;檸檬酸、檸檬酸三鈉***天津市津巨集化工有限公司生產***。將STZ冰浴、避光溶解於0. 1 mol /L的檸檬酸三鈉一檸檬酸緩衝液中，製成濃度為10mg / mL的STZ液。其中檸檬酸三鈉一檸檬酸緩衝液是由0. 1 mol幾檸檬酸三鈉母液和0. 1 mol幾檸檬酸母液按體積比1 :1.32混合後調整pH值4. So1.2.2儀器One Touch穩豪型微量血糖儀及配套血糖試紙，美國強生公司;0. 22 um針孔濾器，德國Cor-ning公司。
1. 3造模方法
1. 3. 1給藥途徑和劑量
造模前，禁食不禁水12 h,稱重。組1、組2、組3 STZ的注射劑量分別為50 mg/kg,55 mg/kg和60 mg/kg。對照組按55 mg/kg注射檸檬酸緩衝液。STZ液配置後注射時問限定在30 min內。為防止酮症酸中毒死亡，必要時注射短效胰島素。
1.3.2糖尿病模型成功標準
注射STZ後72 h，尾靜脈取血測空腹血糖和口服葡萄糖耐量試驗***Oralglucose tolerance test OCTT***。以空腹血糖***11. 1mmol / L，且OCTT服糖後2h血糖,16. 7 mmol / L作為糖尿病大鼠成模標準。
1. 4取材及標本處理
造模3周後，10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，取材檢測。取左心室心肌組織和胰腺置4%甲醛固定，梯度酒精脫水、二甲苯透明，石蠟包埋;連續切片，厚度為5 N,m。
1. 5 HE染色
對心臟和胰腺進行蘇木素一伊紅*** hematoxylinosin staining， HE***染色，Olympus BX51型生物顯微鏡x 200鏡下觀察攝片。
1.6 Masson染色
心臟切片脫蠟至水後，放入Bouin'、液37 0C溫箱內作用2h，流水沖洗切片至黃色消失;Weiger' s鐵蘇木素染10 min，1%鹽酸酒精分化數秒，麗春紅酸性品紅液染10 min-1 %磷鉑酸水溶液處理約5 min，亮綠復染5 min，1%冰醋酸處理1 min梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固;顯微鏡觀察。光鏡下每個切片隨機選取5個HP視野***x 400 *** ,用Image Pro Plus 6. 0影象分析系統計算膠原面積佔總面積比值。
1. 7統計分析
採用SPSS 17. 0統計軟體進行統計學分析，所有資料以均數士標準差***x士S***表示，組問差異性比較採用單因素方差分析，t檢驗;方差不齊用非引數檢驗。以P < 0. 05為差異有統計學意義。
2、結果
2. 1造模後72 h
各組大鼠空腹血糖及OCTT血糖值。
2. 2各組大鼠糖尿病成模率及3週末死亡率
造模72 h後，組1死亡1只，3組模型組餘下大鼠糖尿病均造模成功。至第3週末，組1又死亡1只***6/8***，組2死亡兩隻***6/8***，組3死亡6只***2/8***。空腹注射不同劑量STZ的3組大鼠糖尿病成模率無顯著性差異，但各組大鼠之問的死亡率差別明顯，I塗組1和組2無差異外，其餘各組均有顯著性差異，其中組3死亡率最為明顯，高達75 %，見表2。因組3存活率太低，之後主要觀察組1和組2的病理學變化。
2. 3胰腺組織HE觀察
對照組胰島形態飽滿，輪廓清晰，顏色較淺，胰島細胞分佈均勻且量較多，見圖1A;組2胰島明顯萎縮，輪廓不清晰，胰島細胞數量少，可見較多藍色細胞核，見圖1C;組1可見少數胰島細胞，輪廓較清晰。
2. 4心肌組織HE觀察
對照組大鼠心肌細胞排列整齊，細胞核大小均一，胞漿染色均勻，見圖2A;組2大鼠心肌細胞肥大、排列紊亂，細胞問隙增大，可見肌纖維斷裂，並有炎症細胞浸潤，見圖2C;組1介於兩者之問。
2. 5心肌組織Masson染色
光鏡下觀察心肌細胞呈紅色，膠原纖維呈綠色。對照組膠原纖維含量少，分佈均勻，A;組2心肌內膠原組織明顯增多，排列紊亂，分佈不均，C;組1膠原組織含量比對照組增多，排列比組2稍顯規整，見圖3 B o Image Pro Plus 6. 0影象分析系統心肌組織膠原面積/總面積比值進行測定，結果表明，與對照組相比，組2大鼠心肌組織膠原相對含量明顯增加***P <0.01***，提示55 mg/kg劑量注射後模型大鼠存在膠原纖維增生的病變;組1與對照組，組2和組1無差異性***P > 0. 05***，
3、討論
人類的糖尿病是一種全身代謝性疾病，逐漸進展引發各器官的損害併產生相應的併發症。DCM是由糖尿病引起的特殊性心肌病，對糖尿病患者的生存質量及預後有很大影響。DCM引起糖尿病患者廣泛的心肌結構異常，如心室擴張、間質纖維化和心肌細胞肥大，並最終導致左心室肥大和舒張、收縮功能障礙。
通過給SD大鼠單次腹腔注射STZ，迅速製備了糖尿病模型，經過3周，產生明顯的心肌病變，心肌細胞肥大、排列紊亂，膠原組織明顯增多，分佈不均。其中，55 mg/kg劑量組成模率高、病死率低、心肌病變明顯，適合作為複製糖尿病心肌病模型的推薦劑量。
STZ為一種廣譜抗菌素，具有抗菌、抗腫瘤的效能和致糖尿病的副作用，對實驗動物的胰島B細胞具有高度選擇性。一次大劑量腹腔或靜脈注射STZ可製備糖尿病模型。張春虹等研究發現，SD大鼠一次性腹腔注射鏈脈佐菌素，3周後可出現穩定的糖尿病心肌病狀態。通過超聲心動圖觀察活體心臟以及在離體心臟裡，STZ誘導的糖尿病大鼠心臟舒張功能不全和收縮功能不全都是逐漸進展的。離體心臟中，隨著膠原纖維的沉積，心臟的舒張度相應下降圈。這些都符合人類糖尿病的病理變化以及功能改變。
在實驗中也發現，高劑量組死亡率較高。所以在進行創傷性操作過程中應注意規範無菌操作，如使用一次性注射器及針頭、創傷處預防性給藥、採用袖珍血糖儀並尾靜脈針刺採血等，必要時給予紅黴素軟膏塗抹。每天監測血糖，及時發現血糖過高者，注射短效胰島素，預防酮症酸中毒死亡。
總之，使用STZ建立1型糖尿病心肌病的模型表明，該模型具有成模率高，穩定性好，操作簡便。其對於研究糖尿病心臟損傷的機制以及可能的干預治療都是一個重要的工具。